1. Wybór właściwej linii komórkowej
Wybierając odpowiednią linię komórkową do swojego eksperymentu, weź pod uwagę następujące kryteria:
a. Gatunki: Linie komórkowe inne niż ludzkie i inne niż naczelne mają zwykle mniej ograniczeń dotyczących bezpieczeństwa biologicznego, ale ostatecznie Twój eksperyment zadecyduje, czy użyć kultury określonego gatunku.
b.Features: Jaki jest cel twojego eksperymentu?Na przykład linie komórkowe pochodzące z wątroby i nerek mogą być bardziej odpowiednie do badania toksyczności.
c. Ograniczona lub ciągła: Chociaż wybór z ograniczonej linii komórkowej może zapewnić więcej opcji wyrażania prawidłowej funkcji, ciągłe linie komórkowe są generalnie łatwiejsze do klonowania i utrzymania.
d. Normalne lub transformowane: transformowane linie komórkowe mają zwykle wyższą szybkość wzrostu i wyższą wydajność wysiewu, są ciągłe i wymagają mniej surowicy w pożywce hodowlanej, ale ich fenotyp przeszedł trwałe zmiany w wyniku transformacji genetycznej.
e. Warunki i charakterystyka wzrostu: Jakie są twoje wymagania dotyczące szybkości wzrostu, gęstości nasycenia, wydajności klonowania i zdolności wzrostu zawiesiny?Na przykład, aby uzyskać ekspresję rekombinowanych białek z dużą wydajnością, może być konieczne wybranie linii komórkowych, które mają szybkie tempo wzrostu i zdolność do wzrostu w zawiesinie.
f. Inne kryteria: Jeśli używasz ograniczonej linii komórkowej, czy jest dostępna wystarczająca ilość komórek?Czy linia komórkowa jest w pełni scharakteryzowana, czy trzeba to samemu zweryfikować?Jeśli używasz nieprawidłowej linii komórkowej, czy istnieje równoważna normalna linia komórkowa, której można użyć jako kontroli?Czy linia komórkowa jest stabilna?Jeśli nie, jak łatwo jest go sklonować i wygenerować wystarczającą ilość zamrożonego materiału do eksperymentu?
2. Uzyskaj linie komórkowe
Możesz zbudować własną kulturę z komórek pierwotnych lub możesz zdecydować się na zakup ustalonych kultur komórkowych od dostawców komercyjnych lub non-profit (tj. banków komórek).Renomowani dostawcy dostarczają wysokiej jakości linie komórkowe, które zostały dokładnie przetestowane pod kątem integralności i zapewniają, że kultura jest wolna od zanieczyszczeń.Odradzamy pożyczanie kultur z innych laboratoriów, ponieważ wiąże się to z dużym ryzykiem kontaminacji kultur komórkowych.Niezależnie od źródła, upewnij się, że wszystkie nowe linie komórkowe zostały przetestowane pod kątem zanieczyszczenia mykoplazmą, zanim zaczniesz go używać.
Czas postu: 01-02-2023