1.Co to jest kultura komórkowa?
Hodowla komórkowa odnosi się do usuwania komórek ze zwierząt lub roślin, a następnie hodowania ich w sprzyjającym sztucznym środowisku.Komórki mogą być pobierane bezpośrednio z tkanki i rozkładane środkami enzymatycznymi lub mechanicznymi przed hodowlą lub mogą pochodzić z ustalonych linii komórkowych lub linii komórkowych.
2.Co to jest kultura pierwotna?
Hodowla pierwotna odnosi się do etapu hodowli po oddzieleniu komórek od tkanki i proliferacji w odpowiednich warunkach, aż zajmą wszystkie dostępne substraty (czyli osiągną konfluencję).Na tym etapie komórki należy poddać hodowli wtórnej, przenosząc je do nowego pojemnika ze świeżą pożywką wzrostową, aby zapewnić więcej miejsca na dalszy wzrost.
2.1 Linia komórkowa
Po pierwszej podhodowli, hodowlę pierwotną nazywa się linią komórkową lub subklonem.Linie komórkowe pochodzące z hodowli pierwotnych mają ograniczoną długość życia (tj. są ograniczone, patrz poniżej), aw miarę ich przechodzenia dominują komórki o największej zdolności wzrostu, co skutkuje pewnym stopniem genotypu w populacji zgodnego z fenotypem.
2.2 Szczep komórkowy
Jeśli subpopulacja linii komórkowej zostanie pozytywnie wybrana z hodowli przez klonowanie lub inną metodą, linia komórkowa stanie się szczepem komórkowym.Szczepy komórkowe zwykle uzyskują dodatkowe zmiany genetyczne po rozpoczęciu linii rodzicielskiej.
3.Linie komórkowe ograniczone i ciągłe
Normalne komórki zwykle dzielą się tylko ograniczoną liczbę razy, zanim stracą zdolność do proliferacji.Jest to uwarunkowane genetycznie zdarzenie zwane starzeniem;te linie komórkowe nazywane są skończonymi liniami komórkowymi.Jednak niektóre linie komórkowe stają się nieśmiertelne w procesie zwanym transformacją, który może zachodzić spontanicznie lub może być indukowany przez chemikalia lub wirusy.Gdy skończona linia komórkowa ulega transformacji i uzyskuje zdolność do nieskończonego podziału, staje się ciągłą linią komórkową.
4. Stan kultury
Warunki hodowli każdego typu komórek są bardzo różne, ale sztuczne środowisko do hodowli komórek zawsze składa się z odpowiedniego pojemnika, który zawiera:
4.1 Substrat lub pożywka hodowlana dostarczająca niezbędnych składników odżywczych (aminokwasy, węglowodany, witaminy, minerały)
4.2 Czynniki wzrostu
4.3 Hormony
4.4 Gazy (O2, CO2)
4.5 Regulowane środowisko fizyczne i chemiczne (pH, ciśnienie osmotyczne, temperatura)
Większość komórek jest zależna od zakotwiczenia i musi być hodowana na stałym lub półstałym podłożu (hodowla przylegająca lub jednowarstwowa), podczas gdy inne komórki mogą rosnąć unoszące się w podłożu (hodowla zawiesinowa).
5.Kriokonserwacja
Jeśli w podhodowli występuje nadmiar komórek, należy je potraktować odpowiednim środkiem ochronnym (takim jak DMSO lub glicerol) i przechowywać w temperaturze poniżej -130°C (kriokonserwacja) do czasu, gdy będą potrzebne.Więcej informacji na temat subhodowli i kriokonserwacji komórek.
6.Morfologia komórek w hodowli
Komórki w hodowli można podzielić na trzy podstawowe kategorie w oparciu o ich kształt i wygląd (tj. morfologię).
6.1 Komórki fibroblastów są dwubiegunowe lub wielobiegunowe, mają wydłużony kształt i przyczepiają się do podłoża.
6.2 Komórki podobne do nabłonka są wielokątne, mają bardziej regularny rozmiar i są przymocowane do matrycy w oddzielnych arkuszach.
6.3 Komórki podobne do limfoblastów są kuliste i zwykle rosną w zawiesinie bez przyczepiania się do powierzchni.
7.Zastosowanie hodowli komórkowych
Hodowla komórkowa jest jednym z głównych narzędzi stosowanych w biologii komórkowej i molekularnej.Zapewnia doskonały system modelowy do badania normalnej fizjologii i biochemii komórek (takich jak badania metaboliczne, starzenie się), wpływu leków i związków toksycznych na komórki oraz mutagenezy i skutków rakotwórczych.Jest również używany do badań przesiewowych i opracowywania leków oraz produkcji związków biologicznych na dużą skalę (takich jak szczepionki, białka terapeutyczne).Główną zaletą stosowania hodowli komórkowej do dowolnego z tych zastosowań jest spójność i powtarzalność wyników, które można uzyskać przy użyciu partii sklonowanych komórek.
Czas postu: czerwiec-03-2019